Окраска по граму последовательность на сколько по времени

Окраска по граму последовательность на сколько по времени. Окраска по граму последовательность на сколько по времени Отек, гематомы синяки и болезненность нормальные явления после хирургической коррекции носовой перегородки.

Микробиология. Окраска по Граму: красители, проведение, результаты

В микробиологии окраска по Граму имеет большое значение. Ее применяют для диагностики инфекционных заболеваний, выявления патогенности бактерий. Метод позволяет определить сходные по форме и размеру бактерии, которые относятся к различным видам и родам.

Особенности окраски

Окраска бактерий по Граму – сложный метод, в котором применяют два вида окраса: основной и дополнительный. В процессе выполнения манипуляции применяют обесцвечивающие вещества, к которым относятся спирты и кислоты.

Какая у вас степень владения языком? Вам будет интересно: Какая у вас степень владения языком?

В микробиологии окраску по Граму проводят трифенилметановой группой красителей. К ней относятся генциановые, метиловый синий, кристаллвиолет. Разные виды бактерий дают разные окрасы, образуя прочные соединения с красителями.

Окрасы

В микробиологии окраска по Граму бывает двух видов: грамположительная и грамотрицательная. В первом случае микроорганизмы дают прочные соединения с красителями и йодом. Во время анализа они не обесцвечиваются при воздействии со спиртом, из-за чего не изменяют своего первоначального фиолетового оттенка.

Грамотрицательные окрасы образуются при воздействии с йодом и легко разрушаются под действием йода. В результате микробы обесцвечиваются, а затем приобретают красный оттенок.

Подготовка материала

По правилам микробиологии, окраска по Граму требует предварительной подготовки материалов. Его необходимо распределить тонким слоем по поверхности стекла. Затем мазок подсушивают и после полного высыхания фиксируют. При этом мазок закрепляется на стекле, что позволяет исключить смывание бактерий красителями. К тому же мертвые микроорганизмы окрашиваются лучше, чем живые.

После подготовки материала подбирают метод окрашивания: физический или химический. Первый предполагает воздействие высокой температуры на микробную клетку. Во время химического способа применяют различные химические вещества, которые вызывают коагуляцию протеинов цитоплазмы.

Подготавливают набор для окраски по Граму, предметные стекла с бактериями. Их берут пинцетом или аккуратно пальцами за ребра мазком вверх, затем проводят пару раз над верхом пламени горелки. Процесс должен занимать пару секунд.

Процесс фиксации химическим методом предполагает использование ацетона, спирта, специальных смесей, жидкость Карнуа. Предметное стекло с высушенным мазком погружают в фиксирующее вещество на пятнадцать минут, затем просушивают на воздухе.

Окрашивание

Окраска мазков по Граму проводится по определенному алгоритму.

Чтобы определить, есть ли в мазке грамотрицательные бактерии, проводят дополнительно окрашивание фуксином или сафранином. Препараты наносят на две минуты. В конце процедуры стекло промывают, высушивают.

Результаты

Все грамположительные микроорганизмы окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, а грамотрицательные – в красный. Шарообразные формы обычно относятся к грамположительным видам, а извитые формы – отрицательно окрашиваются. Палочковидные бактерии могут быть грамотрицательными и грамположительными.

Чтобы получить максимально достоверные результаты исследований, рекомендуется применять суточные культуры, а также свежеприготовленные растворы для окрашивания.

Механизм окраски позволяет увидеть и оценить физико-химические особенности строения цитоплазмы, клеточные стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий. У первых содержится много рибонуклеиновой кислоты, белков в цитоплазме, а в клеточных стенках – пептидогликана. Из-за этого во время обработки мазков генцианвиолетом и Люголем у грамположительных видов бактерий образуется прочное соединение ионов йода и красителя.

При обработке спиртами грамположительные микроорганизмы удерживают краситель, а грамотрицательные – обесцвечиваются и окрашиваются дополнительно разведенным фуксином в красный оттенок. Некоторые бактерии способны окрашиваться только на стадии роста.

Применение

Окраску по Граму проводят при анализе вида микроорганизмов в мазках из влагалища и слюны. Этот способ позволяет определить вид микроорганизмов в кале, в плевральной, перитонеальной жидкости и не только. Любые жидкости, где могут содержаться бактерии, исследуют данным методом. После проведения окрашивания врачи подбирают метод лечения, назначая препараты, способные воздействовать на грамположительные или грамотрицательные бактерии.

Методика окраски по Граму: подготовка, проведение, оценка результата

Методика окраски по Граму – экспресс-метод, позволяющий определить вид бактерий. Технология выявления патогена разработана бактериологом Гансом Грамом. Он был необычным человеком, скромным. В своей работе он сказал: «Я публикую методику окраски, заведомо зная, что она имеет некоторые недостатки, но я не теряю надежды, что мой метод будет доработан и станет полезным». Так и произошло. Его технология стала одной из ведущих при определении типа бактерий. Методика окраски по Граму основана на строении прокариот, из-за чего бактерии приобретают тот или иной оттенок.

Обучение финансовой грамотности в школе Вам будет интересно: Обучение финансовой грамотности в школе

Методика приготовления мазка

Рекомендации

Прежде чем приступить к окрашиванию, необходимо подготовить рабочее место и образец. От качества последнего зависит, насколько хорошим будет результат. К примеру, для анализа берут мокроту глубокого кашля, а не просто слюну.

При работе с образцами обязательно соблюдаются правила безопасности. Во время работы на руках должны быть перчатки. Также стоит быть внимательным при работе со спиртом, ацетоном. Эти вещества огнеопасны и легко воспламеняются при нагревании.

При работе с предметными стеклами их берут аккуратно пинцетом или двумя пальцами за боковые края так, чтобы не трогать мазок.

Методика окраски препарата

Подготовка к работе

Начинается методика окраски по Граму с подготовки себя к предстоящей работе. На руки обязательно надеваются стерильные перчатки, длинные волосы должны быть убраны, подвязаны. Рабочее место должно располагаться в стерильном, хорошо проветриваемом помещении. Перед проведением манипуляции обязательно проверяется работоспособность микроскопа.

Следующим шагом будет подготовка предметных стекол. Если они недостаточно чистые, то стекла промывают под проточной водой с мылом. Это поможет удалить грязь, жир. Обязательно поверхность обрабатывается спиртом или другим способом, используемым в лаборатории.

Подготовка образца

Методика окраски по Граму предполагает подготовку образца. Для этого берут предметное стекло и на его центр аккуратно помещают образец. Методика окраски мазков по Граму дает возможность увидеть тип бактерий, культивируемых в чашке Петри.

Для начала работы на стекло наносят тонкий слой исследуемой жидкости. Не стоит ждать более суток от начала забора материала до проведения анализа, так как у многих патогенов разрушается клеточная стенка, и реакция на окрашивание становится совершенно непредсказуемой. Если же предполагается начать исследование тканей, то на предметное стекло стоит нанести пару капель материала. Жидкость распределяется по стеклу ровным слоем ребром другого стекла. Образцу дают подсохнуть.

Если для окраски берут образец из чашки Петри, то процедуру забора материала проводят петлей. А при исследовании мазка его прижимают к предметному стеклу другим стеклом.

Методика окраски препарата по граму

Фиксация образца

Методика окраски препарата по Граму предполагает фиксацию образца. Под действием тепла бактерии пристают к стеклу и не смываются.

Для того чтобы закрепить мазок, необходимо провести над горелкой предметное стекло. Нельзя перегревать стекло, чтобы в образце не появилось изменений.

Можно зафиксировать образец метанолом. Для этого на стекло необходимо нанести пару капель метилового спирта, а излишки слить. Стекло просушивается естественным способом. Этот метод предпочтительнее из-за того, что он меньше повреждает исследуемые клетки и показывает более чистый фон.

Окраска мазков

Окрашивание

Методика приготовления мазка препаратов окраски по Граму предполагает окрашивание в емкости, в которую будет помещен образец. Обычно для этого используется лоток или стеклянное блюдце. В него помещают предметное стекло с препаратом так, чтобы жидкость стекала в лоток.

Сначала на образец наносится раствор кристаллического фиолетового или генцианово-фиолетового. Его набирают в пипетку и несколько капель наносят на препарат. Через минуту проводят оценку результата. Все грамположительные патогены окрасятся в фиолетовый цвет.

Затем краситель смывают водой так, чтобы она слегка обмыла мазок. Далее на образец наносится йод и оставляется на минуту. После этого его так же аккуратно смывают. После этой процедуры на стекло наносится обесцвечивающее вещество. Это может быть раствор ацетона и спирта. Раствором обрабатывают мазок до тех пор, пока не исчезнет фиолетовый оттенок.

На мазок наносится контрастный краситель. Это может быть фуксин или сафран. Он позволяет создать контраст между грамотрицательными и грамположительными бактериями. В результате воздействия препарата грамотрицательные патогены окрашиваются в фуксиевый цвет. Краситель смывают водой.

Завершающим этапом является просушивание предметного стекла. После этого методика окраски по Граму (в микробиологии она используется довольно часто) считается завершенной.

Методика окраски мазков по Граму

Оценка результатов

Предметное стекло помещают под микроскоп. Грамположительные бактерии в мазке будут окрашены в фиолетовый цвет. Грамотрицательные бактерии окрасятся в розовый или красный оттенок. Такое разнообразие возникает в результате особенности строения стенок патогенов. В одни проникает только фиолетовый краситель, а в другие – фуксиевый.

К ошибочному результату может привести длительное нахождение предметного стекла под действием обесцвечивающей жидкости. Поэтому процедуру проводят дважды, чтобы убедиться в правильности диагноза. Повторный анализ позволяет удостовериться, что окраска проведена правильно.

Во время работы с патогенными микроорганизмами всегда соблюдайте осторожность, так как от этого зависит ваше здоровье.